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液相色譜儀的分離系統由色譜柱、色譜柱的連接部件、柱恒溫裝置和固定相等組成。一、色譜柱:液相色譜儀的色譜柱一般用內部拋光的不銹鋼制成,柱內徑為1~4mm,柱長(cháng)為10~50cm,柱形多為直形,內部充滿(mǎn)微粒固定相。近年來(lái),由于高性能填充劑的細?;?,3~5um微粒填料的使用,趨向柱內徑為...
中壓制備色譜是一般由泵提供壓力,壓力在5~20bar。中低壓色譜柱與常壓柱、HPLC柱有比較大的不同:在使用是是封閉的,但是可以比較方便的打開(kāi)與調節長(cháng)度,這與中低壓色譜常常固體上樣相適應的。中低壓制備色譜柱的材質(zhì)主要有塑料柱、玻璃柱、不銹鋼柱三種。中壓制備色譜的主要部件為輸液泵、進(jìn)樣閥、檢測器、餾分收集器等,早期的中壓液相制備色譜,其輸液泵大流速可達156mL/min,并配有阻尼器,以保證液流的穩定;進(jìn)樣器配有0.5-50mL的不同體積的定量管;檢測器有紫外和示差折光檢測器,...
制備型液相色譜儀的分離目的是從混合物中得到純物質(zhì)。為了縮短分離時(shí)間和提高分離效率,制備型液相色譜的的進(jìn)樣品量很大,導致色譜柱的分離負荷相應加大,因此必須加大色譜柱填料,增大柱內徑和柱長(cháng),使用的流動(dòng)相相對增多。然而,當色譜柱上的樣品負載加大時(shí),往往會(huì )導致柱效急劇下降而得不到純產(chǎn)品。制備型液相色譜要解決容量與柱效之間的矛盾,對重現性也要考慮。從經(jīng)濟上來(lái)說(shuō),要少用填料,少用溶劑,盡可能多的得到產(chǎn)品。一、樣品的前處理:制備型液相色譜柱分離的樣品多,比分析型液相色譜柱更容易受污染,樣品...
液相色譜技術(shù)自發(fā)明以來(lái),由于其高效、高靈敏度等特點(diǎn),得到了飛速發(fā)展。近年來(lái),伴隨著(zhù)生物技術(shù)和精細化工的發(fā)展,作為液相色譜分支的制備液相色譜也日益受到重視,成為了生物技術(shù)產(chǎn)品和研究中*的手段。分析色譜與制備色譜的根本區別在于分離目的不同。分析色譜,反映的是樣品的組成,追求的是高效分離和高靈敏度,不需要收集特定的餾分,洗脫液通常作為廢液來(lái)處理。但在制備色譜中,為了節省投資和操作費用,必須以最少的時(shí)間生產(chǎn)最大量的產(chǎn)品。由于目的不同,制備色譜與分析色譜所選用的操作參數,包括色譜柱尺寸...
HPLC過(guò)程中影響待測組分遷移的因素較多,同一組分在不同色譜條件下的保留值可能相差很大。即便在相同的操作條件下,同一組分在不同色譜柱上的保留值也可能有很大差別。因此,在高效液相色譜分析過(guò)程中,對定性分析方法提出了更高的要求。(1)利用檢測器的選擇性進(jìn)行定性將經(jīng)色譜柱分離后的樣品引入并聯(lián)或串聯(lián)的幾種不同檢測器,根據它們不同的檢測性能,視其出峰情況可以初步判別出未知化合物的具體類(lèi)別。(2)反相色譜中的“a、C”指數定性在以硅膠為固定相的反相色譜中,待測組分保留值與流動(dòng)相組成關(guān)系式...
高效液相色譜從原理上與經(jīng)典的液相色譜沒(méi)有本質(zhì)的差別,它的特點(diǎn)是采用了高壓輸液泵、高靈敏度檢測器和高效微粒固定相,適于分析高沸點(diǎn)不易揮發(fā)、分子量大、不同極性的有機化合物。使用高效液相色譜時(shí),液體待檢測物被注入色譜柱,通過(guò)壓力在固定相中移動(dòng),由于被測物種不同物質(zhì)與固定相的相互作用不同,不同的物質(zhì)順序離開(kāi)色譜柱,通過(guò)檢測器得到不同的峰信號,最后通過(guò)分析比對這些信號來(lái)判斷待測物所含有的物質(zhì)。高效液相色譜作為一種重要的分析方法,廣泛地應用于化學(xué)和生化分析中。高效液相色譜跑梯度如何平衡基...
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