制備型液相色譜的分離目的是從混合物中得到純物質(zhì)

　　制備型液相色譜通常都被認為和大容量色譜柱和高流速有關(guān)聯(lián)的。然而并不是以設備的大小和系統消耗的流動(dòng)相的多少來(lái)決定制備液相色譜，而是依據分離目的來(lái)決定。分析液相的目的是給一種組份進(jìn)行定量和定性。制備液相的目的是對產(chǎn)品的單體進(jìn)行提取和純化。與傳統的純化方法（如蒸餾、萃?。┍容^，制備液相是一種更有效的分離方法，因此被廣泛應用在樣品和產(chǎn)品的提取和純化上。隨著(zhù)合成、植化、生化和制藥等領(lǐng)域對高純度組份的需求不斷增加，制備型液相色譜儀應用的領(lǐng)域也在迅速的擴大發(fā)展。

　　制備型液相色譜的分離目的是從混合物中得到純物質(zhì)。為了縮短分離時(shí)間和提高分離效率，制備型液相色譜的的進(jìn)樣品量很大，導致色譜柱的分離負荷相應加大，因此必須加大色譜柱填料，增大柱內徑和柱長(cháng)，使用的流動(dòng)相相對增多。然而，當色譜柱上的樣品負載加大時(shí)，往往會(huì )導致柱效急劇下降而得不到純產(chǎn)品。制備型液相色譜要解決容量與柱效之間的矛盾，對重現性也要考慮。從經(jīng)濟上來(lái)說(shuō)，要少用填料，少用溶劑，盡可能多的得到產(chǎn)品。

　　一、樣品的前處理：

　　制備型液相色譜柱分離的樣品多，比分析型液相色譜柱更容易受污染，樣品前處理非常必要。

　　二、TFA在緩沖液中的作用：

　　1、TFA起到類(lèi)似離子對的作用，一般濃度在0.05%～0.1%。濃度過(guò)高會(huì )使溶液偏酸，長(cháng)時(shí)間使用可能影響色譜柱壽命。

　　2、TFA可抑制硅膠表面的硅醇基，改善堿性化合物的峰形。若0.1%TFA分離不好，可加大濃度到0.2%，但用完后要及時(shí)沖洗色譜柱。

　　3、走梯度時(shí)走成基線(xiàn)漂移，但對制備影響不大。

　　三、降低柱壓的方法：

　　采用1%乙酸水溶液和甲醇二元梯度。

　　四、提高檢測下限的方法：

　　1、如果是等度洗脫，一定要改成單元等度。

　　2、盡量采用乙腈－水系統洗脫。乙腈紫外吸收小，相同條件下噪音小。

　　五、用水要求：

　　不含金屬離子和細菌。

　　六、分析方法開(kāi)發(fā)中流動(dòng)相的調整原則：

　　1、由強到弱：

　　一般先用90%的乙腈或甲醇－水或緩沖溶液進(jìn)行試驗，可很快得到分離結果，然后根據出峰情況調整有機溶劑（乙腈或甲醇）的比例。

　　2、三倍規則：

　　每減少10%的有機溶劑（乙腈或甲醇）的量，保留因子增加約3倍，此為三倍規則。調整時(shí)注意觀(guān)察各個(gè)峰的分離情況。

　　3、粗調轉微調：

　　當分離達到一定程度時(shí)，應將有機溶劑（乙腈或甲醇）10%的改變量調整為5%，并據此規則逐漸降低調整率，直至各組分的分離情況不再改變。