介紹高效液相色譜的幾種分析方法

　　1.液固色譜法使用固體吸附劑，被分離組分在色譜柱上分離原理是根據固定相對組分吸附力大小不同而分離。分離過(guò)程是一個(gè)吸附-解吸附的平衡過(guò)程。常用的吸附劑為硅膠或氧化鋁，粒度5~10μm。適用于分離分子量200~1000的組分，大多數用于非離子型化合物，離子型化合物易產(chǎn)生拖尾。常用于分離同分異構體。

　　2.液液色譜法使用將特定的液態(tài)物質(zhì)涂于擔體表面，或化學(xué)鍵合于擔體表面而形成的固定相，分離原理是根據被分離的組分在流動(dòng)相和固定相中溶解度不同而分離。分離過(guò)程是一個(gè)分配平衡過(guò)程。

　　涂布式固定相應具有良好的惰性;流動(dòng)相必須預先用固定相飽和，以減少固定相從擔體表面流失;溫度的變化和不同批號流動(dòng)相的區別常引起柱子的變化;另外在流動(dòng)相中存在的固定相也使樣品的分離和收集復雜化。由于涂布式固定相很難避免固定液流失，現在已很少采用?，F在多采用的是化學(xué)鍵合固定相，如C18、C8、氨基柱、氰基柱和苯基柱。

　　液液色譜法按固定相和流動(dòng)相的極性不同可分為正相色譜法(NPC)和反相色譜法(RPC)。

　　正相色譜法采用極性固定相(如聚乙二醇、氨基與腈基鍵合相);流動(dòng)相為相對非極性的疏水性溶劑(烷烴類(lèi)如正已烷、環(huán)已烷)，常加入乙醇、異丙醇、四氫呋喃等以調節組分的保留時(shí)間。常用于分離中等極性和極性較強的化合物(如酚類(lèi)、胺類(lèi)、羰基類(lèi)及氨基酸類(lèi)等)。

　　反相色譜法一般用非極性固定相(如C18、C8);流動(dòng)相為水或緩沖液，常加入甲醇、乙腈、異丙醇、丙酮、四氫呋喃等與水互溶的有機溶劑以調節保留時(shí)間。適用于分離非極性和極性較弱的化合物。RPC在現代液相色譜中應用最為廣泛，據統計，它占整個(gè)HPLC應用的80%左右。